Андрей Смирнов
Время чтения: ~13 мин.
Просмотров: 4

Подсчет лейкоцитарной формулы: определение, анализ, методы и правила проведения подсчета

Работа с камерой Горяева

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Размеры малого квадрата камеры Горяева 0,05×0,05 ммРазмеры большого квадрата камеры Горяева 0,2×0,2 ммГлубина камеры 0,1 ммОбъем жидкости под 1 малым квадратом 0,00025 мм3 (мкл) = 1/4000 мм3 (мкл)Объем жидкости под 1 большим квадратом 0,004 мм3 (мкл) = 1/250 мм3 (мкл)Объем камеры Горяева 0,9 мм3 (мкл)

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.

Рис 1. Сетка камеры Горяева

Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева

Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)

В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 20 раз 3–5% раствором уксусной кислоты с метиленовым синим (например, 20 мкл крови и 380 мкл р-ра уксусной к-ты). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать лейкоциты в 100 больших квадратах. Расчет числа лейкоцитов осуществляют, исходя из разведения крови (20) и числа больших квадратов (100), по формуле: X = (a×250×20) / 100, где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови; а – число лейкоцитов, посчитанных в 100 больших квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных лейкоцитов умножают на 50.

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 200 раз в 0,9% растворе NaCl или растворе Гайема (берется 20 мкл крови и 4 мл раствора). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать эритроциты в 5 больших квадратах разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах). Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали. Расчет числа эритроцитов осуществляют, исходя из разведения крови (200) и числа малых квадратов (80), по формуле: X = (a×4000×200) / 80, где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови; а – число эритроцитов, посчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных эритроцитов умножают на 10 000.

Проведение анализа на определение лейкоцитарной формулы

Применение подсчета лейкоцитарной формулы в мазке крови для точной диагностики патологий является довольно сложным, поскольку при различных воспалительных процессах в организме соотношение частиц часто сходно. Обычно полученные сведения используют для отслеживания динамики болезни и степени эффективности терапии. Подготовка к забору крови для исследования не слишком сложная – человеку нужно лишь отказаться от еды не менее чем за четыре часа до анализа, а накануне желательно избегать сильных эмоциональных и физических нагрузок.

Для определения лейкоцитарной формулы материалом выступает венозная кровь. Лаборант перед процедурой пережимает специальным ремешком предплечье пациента, затем вводит в локтевом сгибе в вену тонкую иглу, кровь по которой поступает прямо в пробирку. Потом каплю полученного материала переносят на пластинку из стекла, чтобы посредством микроскопа подсчитать соотношение лейкоцитов и их количество. Если в клинике есть современное оборудование, частицы считаются специальным анализатором, а необходимость вмешательства человека возникает лишь тогда, когда результат отражает сильные отклонения от нормы или присутствие аномальных частиц. Полученные значения может оценить лечащий врач.

Подсчёт эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере Горяева

Количество эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева подсчитывают с помощью микроскопа. Для этого заполненную разведенной кровью камеру Горяева помещают на предметный столик микроскопа и под малым увеличением (окуляр 15 X или 10Х, объектив 8Х), с опущенным конденсором находят сетку камеры. К подсчету форменных элементов приступают через 2-3 минуты после заполнения камеры кровью.

Эритроциты подсчитывают в пяти квадратах, каждый из которых разделен на 16 маленьких квадратиков. Подсчет начинают с левого верхнего квадрата, а затем продвигают камеру по диагонали сверху вниз. Во избежание повторного подсчета одних и тех же эритроцитов руководствуются следующим правилом: все эритроциты внутри квадратика и на разграничительных линиях подсчитывают только тогда, когда они большей своей половиной заходят внутрь квадратика; клетки, пересеченные разграничительной чертой пополам, подсчитывают лишь на двух сторонах из четырех сторон квадрата (на левой и верхней); клетки, выходящие большей своей половиной за пределы разграничительных линий, совсем не считают.
Результаты подсчета эритроцитов по каждому из пяти больших квадратов записывают и суммируют. Для расчета количества эритроцитов пользуются следующей формулой:

где х — количество эритроцитов в 1 мм3 крови; а — сумма эритроцитов, подсчитанных в пяти квадратах; б — разведение крови в 200 раз; в — количество сосчитанных маленьких квадратиков — 80.

Для упрощения расчета к количеству подсчитанных эритроцитов приписывают четыре нуля.
В норме количество эритроцитов от 4 500 000 до 5 000 000 в 1 мм3 крови.
Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах. При подсчете их руководствуются теми же правилами, которые указаны для эритроцитов, а затем производят расчет по приведенной выше формуле, в которой цифра разведения равна 20, а количество подсчитанных квадратов — 1600.
Для простоты расчета количество подсчитанных лейкоцитов умножают на 50 или делят на 2 и приписывают два пуля.
В норме количество лейкоцитов от 5000 до 8000 в 1 мм3 крови.

Чистка смесителей. После подсчета лейкоцитов смесители моют следующим образом: резиновой грушей удаляют остатки крови, после чего их многократно промывают дистиллированной водой, спиртом и просушивают эфиром или в сушильном шкафу. Показателем чистоты смесителей служит свободное передвижение бусинки при встряхивании смесителя.

В последнее время для подсчета эритроцитов и лейкоцитов пользуются целоскопом отечественного производства СФЭК-62, который позволяет быстро и точно определить количество форменных элементов в 1 мм3 крови.
Техника его использования подробно изложена в инструкции, приложенной к прибору.

Подсчет лейкоцитарной формулы. Исследование морфологии клеток крови

Лейкоцитарная
формула (лейкограмма) –
процентное
соотношение различных видов лейкоцитов.

Подсчет лейкоцитарной формулы проводится
с помощью иммерсионной системы микроскопа.
Для работы используется специальное
иммерсионное масло, каплю которого
наносят на препарат. Под визуальным
контролем в нее опускают иммерсионный
объектив, маркированный черной полоской
и, глядя в окуляр, медленным движением
макровинта поднимают тубус микроскопа
до получения изображения, а с помощью
микровинта добиваются четкости.

Для регистрации клеток
при подсчете лейкоцитарной формулы
наиболее широко используется счетчик
лабораторный СЛ-1 (рис. 6).

Рисунок 6–
Счетчик лабораторный СЛ-1

В последнее время для подсчета
лейкоцитарных формул выпускают более
совершенные варианты счетчиков, работа
с которыми проводится в соответствии
с прилагаемыми к ним инструкциями.

Лейкоциты располагаются
в мазке неравномерно: более крупные
клетки (моноциты, эозинофилы, нейтрофилы)
встречаются чаще по краю мазка, более
мелкие лимфоциты — в середине. Поэтому
подсчет лейкоцитарной формулы следует
проводить как по краю, так и по середине
мазка (рис. 7).

Рисунок 7 – Техника
подсчета лейкоцитов

Подсчет ведут по зигзагообразной линии
(«линии Меандра»): 3–5 полей зрения вдоль
края мазка, затем 3–5 полей зрения под
прямым углом к середине мазка, потом
3–5 полей зрения параллельно краю и
вновь под углом 90возвращаются
к краю мазка. Такое движение продолжают
до тех пор, пока не будет сосчитана
половина клеток. Затем переходят на
противоположную сторону мазка и
аналогично считают вторую половину
клеток.

При подсчете лейкоцитарной формулы
подсчитывают целые, не разрушенные
клетки, а также обращают внимание на
наличие дегенеративных изменений в
лейкоцитах (токсогенную зернистость,
пельгеризацию и/или гиперсегментацию
ядер, пикноз ядер, вакуолизацию ядер и
цитоплазмы и др.). Клинико-диагностическое значение:
при увеличении или уменьшении тех
или иных форм лейкоцитов можно судить
о различных патологиях

Клинико-диагностическое значение:
при увеличении или уменьшении тех
или иных форм лейкоцитов можно судить
о различных патологиях.

Контрольные вопросы по теме:

  1. Какие Вы знаете патологические формы
    лейкоцитов?

  2. В чем заключается общебиологическое
    значение лейкоцитозов и лейкопений?

  3. При каких ситуациях встречается
    физиологический лейкоцитоз?

  4. При каких состояниях и заболеваниях
    встречается эозинофилия?

  5. Что представляет собой панмиелофтиз?

  6. Что характеризует индекс Боброва?

  7. О чем свидетельствует сдвиг лейкоцитарной
    формулы вправо?

  8. Какие Вы знаете сдвиги лейкоцитарной
    формулы влево?

  9. Охарактеризуйте гематологические
    критерии агранулоцитозов.

  10. Правила расчета относительного и
    абсолютного увлечения и снижения
    различных групп лейкоцитов в лейкоцитарной
    формуле.

  11. Назовите отличия лейкемоидных реакций
    от лейкозов?

Изучение счетной камеры Горяева и заполнение ее кровью для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в специальных счетных камерах. Для этой цели пользуются счетной камерой Горяева, которая представляет собой стекло с нанесенными на него двумя сетками. Сетки отделены одна от другой углублениями и делятся разграничительными линиями на 225 квадратов. Площадь сетки 9 мм2, высота, создающаяся при притирании шлифованного покровного стекла в камере, 0,1 мм, объем 0,9 мм3. Перед заполнением камеры кровью ее моют водой и насухо вытирают.

К сухой поверхности камеры притирают шлифованное покровное стекло, плавно продвигая его по ней взад и вперед до появления цветных колец Ньютона в местах соприкосновения покровного стекла со стеклом камеры. Затем кровь в смесителе встряхивают в течение 1-2 минут, после чего из смесителя выпускают на ватку 1-2 капли крови, следующую каплю помещают перед шлифованным покровным стеклом. При нанесении капли крови надо следить за тем, чтобы в пространство над сеткой камеры не попал воздух и чтобы не было избытка жидкости. Одну сетку заполняют для подсчета эритроцитов, вторую — для подсчета лейкоцитов.

Для заполнения камеры Горяева кровью, взятой по способу Н. М. Николаева (пробирочный метод), поступают следующим образом. К счетной камере притирают шлифованное стекло. Из каждой пробирки, предварительно встряхнув ее, с помощью стеклянной палочки с оплавленным концом берут по одной капле жидкости и заполняют ими раздельно обе сетки камеры, для чего каплю помещают перед щелью, образующейся между шлифованным стеклом и счетной камерой, в результате чего жидкость заполняет пространство над сетками.

Метод Нечипоренко в модификации Пытель А. Я.

В детской и урологической практике, при диспансеризации широко применяется метод Нечипоренко в модификации Пытель А. Я. Сбор мочи и оборудование те же, что и при обычном методе Нечипоренко, отличие заключается в самом подсчете форменных элементов (подсчет форменных элементов осуществляется в камере Горяева, но не во всей, а только в 100 больших квадратах), в связи с чем нормальное количество лейкоцитов для данного метода отличается от такового при классическом методе Нечипоренко и это следует учитывать врачу при интерпретации полученных данных.

Мочу хорошо перемешивают, наливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин. Удаляют верхний слой, оставляя 1 мл мочи вместе с осадком. Хорошо перемешивают осадок, заполняют камеру Горяева и производят подсчет раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров в 100 больших квадратах (1600 малых квадратов). Учитывая, что объем малого квадрата равен 1/4000 мм 3 . Подсчет форменных элементов в 1 мм 3 производят по следующей формуле:

x = (a*4000)/(b*c),

где: x – количество форменных элементов в 1 мм3 мочи, a – количество форменных элементов в 100 больших квадратах, b – количество малых квадратов, в которых производился подсчет, c – количество мочи, взятой для центрифугирования (в миллилитрах).

При умножении полученного числа на 1000, узнают количество форменных элементов в 1 мл мочи:

K = (a*4000*1000)/(1600*10) = a*250,

где: K – количество форменных элементов в 1 мл мочи, a – количество форменных элементов в 100 больших квадратах.

При получении небольшого количества мочи в случае катетеризации мочеточника число форменных элементов подсчитывают в 1 мл нецентрифугированной мочи, используя ту же формулу, но исключая в знаменателе c. Тогда формула будет иметь следующий вид:

K = (a*4000*1000)/b = (a*4000*1000)/1600=a*2500.

В норме при подсчете форменных элементов в моче по методу Нечипоренко в модификации Пытель в 1 мл мочи содержится лейкоцитов – до 4000, эритроцитов – до 1000, цилиндров – до 20.

  • Иванова В. Н., Первушин Ю. В. и соавторы, «Методы исследования мочи и клинико-диагностическое значение показателей состава и свойств мочи» — Методические рекомендации, Ставрополь, 2005 г.
  • Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е. А. Кост. Москва «Медицина» 1975 г.
  • Козловская Л. В., Николаев А. Ю. Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования — Москва, Медицина, 1985 г.
  • Краевский В. А. Атлас микроскопии осадков мочи. Москва, «Медицина», 1976 г.
  • Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике под редакцией Базарновой М. А., Морозовой В. Т. — Киев, «Вища школа», 1988 г.
  • Справочник «Лабораторные методы исследования в клинике» под ред. проф. В. В. Меньшикова. Москва, «Медицина», 1987 г

Анализ мочи по методу Каковского-Аддиса

Метод Каковского-Аддиса является унифицированным методом количественного определения форменных элементов в суточном объеме мочи. Этот наиболее трудоемкий и имеющий много недостатков метод все реже применяется на практике в последнее время.

Раздел: Анализ мочи

Метод Амбурже относится к методам количественного определения форменных элементов в моче. При этом определяется количество форменных элементов, выделенных с мочой за 1 минуту.

Раздел: Анализ мочи

Клетки мочи. Методы количественного определения форменных элементов в моче

Методы количественного определения форменных элементов в моче позволяют определить точное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров, выделенных с мочой.

Раздел: Анализ мочи

Микроскопическое исследование осадка мочи

Микроскопическое исследование осадка мочи является неотъемлемой частью общеклинического исследования и часто служит основным методом диагностики заболеваний почек и мочевыводящих путей.

Раздел: Анализ мочи

Сбор мочи проводится после тщательного туалета наружных половых органов, чтобы в мочу не попали выделения из них. Лежачих больных предварительно подмывают слабым раствором марганцевокислого калия, затем промежность вытирают сухим стерильным ватным тампоном в направлении от половых органов к заднему проходу. Собирая мочу у лежачих больных, необходимо следить, чтобы сосуд был расположен выше промежности во избежание загрязнения из области анального отверстия. Правильный сбор мочи нужен для получения достоверного результата анализа.

Раздел: Анализ мочи

Методика подсчета лейкоцитов в крови в камере Горяева

Для подсчета лейкоцитов с помощью камеры Горяева необходимо подготовить образец крови и само приспособление. Для этого выполняются следующий пункты:

разведение биологической жидкости раствором уксусной кислоты с метиленовым синим в пропорции 1:20;
стекло протирают спиртом и сухой марлевой салфеткой до появления специфических колец, при этом важно не повредить поверхность;
пустое стекло предварительно просматривают под микроскопом, чтобы предотвратить попадание инородных предметов;
полученную разведенную кровь добавляют на углубление камеры с помощью стеклянной палочки;
жидкость должна распределится равномерно, для этого выжидают 1-2 минуты после ее нанесения;
на предметное стекло направляют микроскоп, подсчитывают все лейкоциты;
полученную цифру вставляют в формулу, которая подсчитывает общее количество лейкоцитов в объёме жидкости.

Внимание! Если в жидкость попал воздух, подсчет лейкоцитов невозможен. Камеру промывают дистиллированной водой, наливают разведенную кровь повторно

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева с уксусной кислотой уничтожает все эритроциты, а метиленовый синий дает окрашивание белых кровяных телец.

При получении данных пациентами или врачом следует учитывать, что метод не является достаточно точным. Лаборант может ошибиться в подсчете, пропустить некоторые клетки. Более информативные данные получают при подсчете лейкоцитов с помощью полуавтоматических анализаторов, которые в точности измеряют число клеток в 1 мл биологической жидкости.

Читайте обзор всех методик подсчета лейкоцитов.

Формула для подсчета количества лейкоцитов в камере Горяева

Подсчет клеток осуществляет, учитывая что кровь разводилась в 20 раз, клетки считались в 100 квадратах. Поэтому используют следующую формулу:

L=(a×250×20)×106/100

  • L – обозначение лейкоцитов, которые необходимо рассчитать;
  • a – количество подсчитанных лейкоцитов;
  • 250 – число, при умножении на которое получается количество клеток на 1 мкл крови, так как объём большого квадрата составляет 1/250 мкл;
  • 20 – разведение материала при подсчете лейкоцитов в камере Горяева;
  • 100 – число больших квадратов;
  • 106 – число мкл в 1 квадрате.

Подробно о том, как правильно подсчитать лимфоциты.

Норма лейкоцитов в крови и отклонения

По формуле выводится количество лейкоцитов на 1 литр крови. У здорового человека это число составляет 4-9×109/л. Показатели могут варьировать в норме, слега выходя за пределы значений, в зависимости от следующих факторов:

  • возраст;
  • прием пищи;
  • время суток;
  • состояние организма.

Если после подсчета формулы, показатель резко возрастает или снижается, исследования проводят повторно. После подтверждения результата бланк анализа передают пациенту или врачу.

Повышение лейкоцитов происходит при:

  • инфекционных, вирусных, грибковых заболеваниях (это означает, что организм борется с болезнью);
  • злокачественных и доброкачественных новообразованиях, которые приводят к резкому увеличению количества форменных элементов крови.

Снижение количества лейкоцитов появляется при нарушениях иммунной системы. Возможны следующие состояния:

  • врожденный или приобретенный иммунодефицит;
  • патологические состояния красного костного мозга, приводящие к снижению продукции форменных элементов крови.
Рейтинг автора
5
Материал подготовил
Максим Иванов
Наш эксперт
Написано статей
129
Ссылка на основную публикацию
Похожие публикации